环状RNAhsa_circ_0000400在原发性结肠癌中的表达水平及其临床诊断意义

　　文档类型： 临床研究论文
　　适配人群： 肿瘤科临床医生、分子生物学研究者、检验科技术人员、医学专业学生

　　文档可解决的实际问题：
　　该研究系统评估了环状RNA hsa_circ_0000400在原发性结肠癌组织及血液中的表达特征，并探讨其作为血清诊断标志物的可行性，为结肠癌的早期筛查、辅助诊断提供新的分子靶点参考。
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　　环状RNA hsa_circ_0000400在原发性结肠癌中的表达水平及其临床诊断意义，是近年来肿瘤液体活检领域关注的热点。该研究基于常熟市第二人民医院普外科收治的结肠癌患者标本，通过组织与血液双维度验证，明确了该环状RNA在癌组织与癌旁正常组织、患者血清与健康人群血清中的差异表达，并利用受试者工作特征曲线评估其诊断效能。

　　研究标本与分组
　　组织标本来源于2016年1月至2019年12月收治的56例结肠癌患者，其中男性31例、女性25例；年龄小于60岁21例，大于等于60岁35例；TNM分期I~II期14例，III~IV期42例；高、中分化41例，低分化15例。每例患者同时取癌组织及距癌组织3厘米的癌旁正常组织，标本经TRIzol浸泡后于-80℃保存。血液标本采集时间为2018年1月至2020年10月，共78例结肠癌患者（男42例、女36例；年龄<60岁32例，≥60岁46例；TNM分期I~II期25例，III~IV期53例；高、中分化52例，低分化26例），于手术前清晨空腹采血5毫升，所有患者均未接受过化疗、放疗或靶向治疗。对照组为2020年9月常熟市古里中心卫生院健康体检人群。

　　检测方法与关键试剂
　　总RNA采用TRIzol法提取，经NanoDrop 1000分光光度计测定纯度（260nm/280nm吸光度值1.8~2.0）。逆转录使用HiScript II Reverse Transcriptase试剂盒，反应体系20μL，条件为42℃ 3分钟、60℃ 15分钟、85℃ 5分钟。实时荧光定量PCR采用SYBR Green PCR试剂盒，反应体系10μL，循环条件：95℃预变性5分钟，95℃ 10秒，60℃ 30秒，共40个循环。以Human/Mouse 18S为内参，相对表达量采用2^(-ΔΔCt)法计算。hsa_circ_0000400引物序列：上游ACTTACCTCGACTCTTAGCTTGTCG，下游GGTCTTGTCACTTGGCATCTGG；18S引物：上游GAACGAGACTCTGGCATGCTA，下游CACGCTGAGCCAGTCAGTGTA。血清CA19-9检测采用迈瑞CL-6000i全自动化学发光免疫分析仪及配套试剂。

　　统计学分析
　　所有数据以均数±标准差表示，组间比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。采用受试者工作特征（ROC）曲线评价hsa_circ_0000400的诊断效能。

　　核心结论
　　研究结果显示，hsa_circ_0000400在结肠癌组织中的表达水平显著高于癌旁正常组织，在结肠癌患者血清中的表达亦显著高于健康对照组。ROC曲线分析提示该环状RNA具有较好的诊断价值，其灵敏度与特异度均达到临床可接受范围。结合血清CA19-9检测，hsa_circ_0000400可作为原发性结肠癌辅助诊断的潜在分子标志物，尤其适用于早期筛查及术后监测。

　　参考价值
　　该研究为结肠癌的分子诊断提供了新的候选靶点，数据来源于真实临床标本，实验流程规范，统计方法严谨。临床医生可据此评估环状RNA检测在结肠癌诊疗中的应用前景，研究者可进一步开展多中心、大样本验证。