雷公藤红素抑制口腔癌作用初探

目录（实验性论文）目录（实验性论文）》2摘要3引言41细胞、仪器和试剂.51.1细胞系及培养条件51.2主要仪器.1.3材料与试剂62实验方法72.1RADA-16与CeT形成药物传递系统(DDS)72.2细胞系及培养条件82.3细胞传代2.4细胞冻存2.5细胞计数92.6CCK8实验92.7细胞克隆形成实验,,,92.8 Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡.102.9 Hoechst33342染色荧光显微镜检测细胞核形态...113结果.113.1CeT显著抑制CAL细胞活性113.2细胞克隆实验测定细胞增殖能力和细胞数量统计结果.…123.3调亡免疫结果134.讨论...14参考文献.….14致谢…16雷公藤红素抑制口腔癌作用初探摘要摘要目的本文是对卫矛科雷公藤属的藤本灌木植物雷公藤根皮部位的有效成分一一雷公藤红素进行研究，探究雷公藤红素对口腔恶性肿瘤的抑制作用。方法用短肽RADA16对雷公藤红素进行包裹；利用CCK8和克隆形成的方法检测雷公藤红素对细胞的存活的影响；通过加入Annexin V-ITC/PI试剂对细胞染色，在流式细胞仪中检测雷公藤红素对细胞调亡的影响；通过加入Hoechst33342工作试剂对细胞染色，在荧光显微镜下观察细胞核的形态结果在雷公藤红素的存在下抑制细胞的生长，诱导细胞调亡。结论本实验通过对雷公藤红素抑制口腔癌药理实验的研究，进一步丰富了雷公藤对癌症的研究内容。关键词：雷公藤红素；CCK8和克隆形成染色法；Annexin V-FTC/PI双染法；细胞凋亡RADA16A preliminary study of Celastrol inhibition of oral cancerAbstract:Objective In this paper,Celastrol the active ingredient of the root bark of thevine and shrub of the family Euonymus,was studied,and the inhibitory effect of Celastrol onthe oral malignant tumors was explored.Methods Author used the CCK8 and the ColonyFormation to inspect the effect of Celastrol on cell survival.The effect of Celastrol on apoptosiswas detected in flow cytometry by adding Annexin V-FITC/PI reagent to stain cells.Cells werestained by the addition of Hoechst33342 working reagent,and the morphology of the nucleiwas observed under the fluorescence microscope Results Inhibits cell growth and inducesapoptosis in the presence of Celastrol.Conclusion In this study,the pharmacologicalexperiments of Celastrol in inhibiting oral cancer were studied,which further enriched theresearch content of Tripterygium wilfordii on cancer.1Key Words:Celastrol;CCK8 and clone formation staining;Flow Detection of Apoptosisby Annexin V/PI;Apoptosis;RADA16引言雷公藤红素(Celastrol)属于五环三菇类化合物，从中药雷公藤或南蛇藤的根皮、茎和叶部位提取，分子量为450.61，易溶于AE、CHCl3、DMS0等有机溶剂[四。雷公藤红素是卫矛科植物雷公藤和南蛇藤的主要有效活性成分之一，并且具有较强的免疫调节、抗炎、抗病原微生物、抗肿瘤等药理学活性[24]口腔恶性肿瘤大部分是发生在口腔、口咽部位的恶性肿瘤，发病范围包括唇、舌根、舌、牙龈、口底、腭部、扁桃体、口咽及口腔内其余部位，口腔恶性肿瘤中以鳞状细胞癌占比最高，超过了9O%)。人类乳头瘤状病毒(human papilloma-virus,.HPV)、食用槟榔、抽烟等均为诱发口腔癌发生的高危因素，发病期常伴有严重疼痛、口腔出血、渍疡」牙齿不能正常咬合，晚期可能会发生面部畸形、组织坏死症状，且癌细胞能扩散到身体其他部位，降低患者生活的质量，严重影响健康向。现阶段随着越来越多的中药活性成分在抗肿瘤研究研究的深入研究，国内外都认可中药活性成分药理价值。而雷公藤中的活性成分一雷公藤红素作为一种目前研究比较深入且具备良好成药性的中药活性成分，具有广谱性、多机制性、多效性等特点，已通过实验证实其可以有效地抑制肿瘤细胞的恶性增殖冈，本研究基于这些特点来探究雷公藤红素在口腔癌细胞中的抑制程度。目前对雷公藤红素的研究大都集中在细胞实验与动物实验层面因此我们需要对其进行更加全面而深入地研究阅，尽管雷公藤红素具有较好的抗肿瘤药理作用前景，但至今仍然没有药品上市，一个主要因素是其毒性较大，口服给药后会造成胃肠道不良反应，且易发生全身性的不良反应，另外一个不足之处是雷公藤红素为难溶性物质，口服生物利用度较低⑨，上述因素严重限制了该药物的临床应用，因此本实验通过用短肽RADA16包裹CT制成缓释制剂来减少其水溶性较差的缺点，进而探究其抗肿瘤活性。2细胞、仪器和试剂1.1细胞系及培养条件人舌鳞状细胞癌细胞CA工27细胞采购于中国典型培养物保藏中心，采用DEM完全培养基(90%DMEM+10%胎牛血清+0.5%青霉素/链霉素双抗)进行对其孵育.细胞培养箱条件是：湿度为95%、温度为37℃、5%C02。在温度25℃，湿度为50%±20%下，对细胞12h光照一12h遮光循环处理.1.2主要仪器表1实验室所用仪器仪器型号细胞培养箱Thermo Fisher Scientific公司双光束紫外-可见分光光度计北京普析通用仪器有限公司(T9CS)恒温磁力搅拌器(85-2型)浙江金坛市仪器厂激光粒度仪(90PLus)美国布鲁克海文仪器公司倒置荧光镜OLYMPUS公司-80C超低温冰箱Thermo Fisher Scientific公司-20°C冰箱海尔集团赛多利斯科学仪器（北京）有限公BSA125-CW分析天平司移液枪Eppendorf公司超净工作台苏州安泰空气技术有限公司高速冷冻离心机Eppendorf公司超纯水净化器Millipore公司96,12,6孔板Nest公司3