大肠杆菌来源的HPV6L1重组蛋白的基础及应用研究

摘要疫苗Gardasil的0.016μg。在稳定性研究中，HPV6VLP疫苗原液在25℃放置7Day后，其平均水化半径，HPLC保留时间，沉降系数，体外相对抗原含量均未发生明显变化。在37℃放置7天后，HPV6VLP的平均水化半径有略微增大，而其余检测指标也未见明显变化。上述研究结果证实了本研究所制备的HPV6VLP具有良好的免疫原性及稳定性。由于HPV VLP具有复杂的空间构象，而且HPV疫苗的效果也严格依赖于其正确的空间构象的形成。因此本研究在成功制备HPV6VLP疫苗的基础上进一步对该疫苗的结构及抗原表位进行研究，以阐明HPV6VLP的结构及表位特征，为建立全面的疫苗质控体系及进行疫苗设计奠定基础。结构分析显示，组成大肠杆菌来源HPV6VLP的五聚体在大小，分子量上均与理论值吻合，并且在一定条件下能够形成晶体，具有正确的构象。而HPV6VLP为空心圆形颗粒，平均约半径为25m,表面可见壳粒，具有典型的HPV VLP的特征，与真核来源的HPV VLP无异。通过对多个中试批次样品进行分析，可以发现所制备的HPV6VLP在颗粒半径，保留时间，沉降系数等指标上具有高度的一致性。在表位研究中，本研究筛选得到了HPV6优势中和单抗7A8,13H5,这两株单抗同时还具有HPV6/11交叉中和活性。利用这两株单抗模型与HPV6五聚体模型的分子对接，可以将HPV6的优势中和表位定位于HPV6VLP表面的DE,FG,HI三个环状区域上。而后进一步通过同源扫描的方法验证了上述对接结果，并且进一步将上述表位定位于HPV6VLP表面的三个区域：V138N139V140G41,E259V260G261E262p263V264p265D266T267L268269P70,S345T346Y347T348N349S350D351Y352。综合上述结果，本研究成功利用大肠杆菌表达系统制备了HPV6VLP疫苗，验证了其稳定性，有效性及结构正确性，并且对其优势中和表位进行了定位。这些工作将为HPV6疫苗研究及新型HPV疫苗设计提供参考。关键词：人乳头瘤病毒6型晚期蛋白L1大肠杆菌表达系统类病毒颗粒疫苗表位定位2