IL-17及其受体通过Jagged-Notch信号通路调控Th1Th2细胞失衡影响大鼠分泌性中耳炎发生发展的机制

安微医科大学硕士学位论文L-17及其受体通过Jagged-Notch信号通路调控Th1/Th2细胞失衡影响大鼠分泌性中耳炎发生发展的机制中文摘要：背景分泌性中耳炎(Secretory Otitis Media,SOM)是临床上耳鼻喉科常见病之一，它主要以引起听力下降及中耳积液为特征，且是一种非化脓性炎症。听力损失持续存在或反复发作时，严重影响幼儿的语言发育、行为发展及性格形成，最终严重影响患者的生活质量。目前，自身免疫性因素促进SOM发生发展具体机制尚不明确。T17细胞具有重要免疫调节作用，L-17通过与受体特异性结合，在分泌性中耳炎中起到重要的作用。一般情况下机体中T1/Th2细胞处于相对平衡的状态，当打破这种Th1/Th2的平衡状态，就很可能破坏炎症因子的动态平衡，进而引起许多疾病的产生和发展。结合国内外研究进展和课题组前期研究基础，提出如下研究假设：IL-17结合IL-l7R通过激活Jaggedl--Notch信号通路，影响Thl/Th2细胞比例，调控SOM发生发展。本研究通过构建SOM大鼠模型，通过运用RT-PCR技术，Western Blot,HE染色，PAS染色等技术进行研究。阐明IL-17结合IL-17R通过激活Jagged1-Notch信号通路，导致Thl/Th2细胞失衡，调控SOM发生发展以及相关机制。方法动物处理：应用随机方法将40只成年SD雄鼠分为正常组、PBS组、SOM组和S0M+IL-17组，每组10只(20耳)大鼠。S0M组和S0M+IL-17组大鼠采用卵清蛋白腹腔注射致敏及鼓膜穿刺耳内激发2次制成变应原诱发的变态反应相关的的SOM大鼠模型，基于内镜下观察积液征验证建模成功，PBS组采用卵清蛋白腹腔注射致敏，耳内激发阶段将用PBS取代卵清蛋白进行耳内注射，SOM+IL-17组大鼠处理与S0M组一致，但在耳内激发前1小时进行鼻孔滴注L-17抗体。实验内容：E染色后观察中耳粘膜上皮组织病理变化：酶联免疫吸附(Enzyme Linked Immunosorbent Assay,ELISA法)检测IL-17、、IL-4、IFNY在SOM大鼠外周血清和中耳灌洗液中的表达；Western B1ot法观察IL-17、Notchl、Jagged1、DLLA在中耳组织中蛋白的表达：逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)分别检测大鼠外周血及中耳组织中IL-17、Jaggedl、DLL4、Notch1 mRNA表达水平。结果基于内镜观察和声导抗检查确认成功建立免疫相关的SOM大鼠模型。1.SOM大鼠模型组的中耳积液L-17的含量显著高于正常组大鼠中耳灌洗液含量(P<0.05),而外周血浆中IL-17含量高于正常对照组外周血含量(P<0.05)2.