H5N1亚型禽流感病毒活病毒实验全过程实验室微环境集群监测和评价

根据GenBank中已经发表的牛TLR2、TLR4的cDNA序列，设计特异性引物及TaqMan探针，成功地扩增出基因表达水平可以用于定量实验的片段，建立了灵敏、准确性、稳定性均较好的检测荧光定量RT-PCR方法，分别对添加E2+LAT/LPS、LAT/LPS+E2、P+LAT/LPS、LAT/LPS+P后TLR2/4mRNA的表达水平进行定量检测。结果发现，通过上述刺激以后，TLR2/4mRNA的表达水平由高到低依次为E2、P、LTA/LPS、LTA/LPS+E2、E2+LTA/LPS、P+LTA/LPS、P+LTA/LPS。本实验应用定量的方法进一步证实E2、P对TLR2、4表达的调节作用，同时建立了快速稳定的TLR2、4的定量检测方法，特异性高，灵敏性强。上述结果证实牛子宫内膜上皮细胞有TLR2、4mRNA及蛋白的表达，表达情况随配体LTA/LPS的刺激、P的作用而增加(P<0.05),但随着E2的作用而减低(P<0.05)。同时检测了LTA/LPS诱导TLR24产生的细胞因子、趋化因子L-1、L-8、TNF-a的分泌情况，证实三种具有代表性的细胞因子的分泌水平随着LAT/LPS、P的刺激而增加(P<0.05),但随着E2的刺激降低(P<0.05)。研究证明，TLR2、4表达和功能的调节可以通过E2、P进行，诱导产生的细胞因子和趋化因子是正常子宫内膜功能及炎症的发病机制中的关键，如子宫内膜炎的子宫内膜功能障碍。TLR2、4识别细菌的LTA和LPS以及由此产生的生产的细胞因子和趋化因子是子宫内膜受病原菌入侵后保护作用的关键。同时证明E2、P对子宫内膜上皮细胞免疫水平的影响是通过调节TLRs的表达及生物学活性来实现的。因此E2P对TLR24功能的影响，特别是抑制/促进细胞因子和炎症趋化因子的分泌和释放，是维护和捍卫子宫内膜的关键。关键词：牛子宫内膜炎，Tol样受体，雌激素，孕酮，细胞因子2